会议速递 | RNA 测序在线粒体病及罕见病应用的文献学习

为严格执行疫情常态化防控制度，本次学习班邀请国际及国内外省市专家以线上&线下相结合的直播方式授课及讨论。学员参会包括线上及现场两种方式。更多详细课程信息请扫描文末二维码回看视频直播（回看时间：9月14日至9月28日）。

学习班涉及内容包括儿童癫痫内外科诊疗、影像学及病理学进展，神经免疫性疾病、线粒体疾病、运动障碍、抽动障碍、吉兰巴雷谱系疾病、脊髓性肌萎缩等热点问题，同时设立病例讨论环节，搭建国内外儿童神经病学专业学者的交流及合作平台，促进国内外儿科神经病学学者、医师学术交流，培养学科骨干。

学术主题分享

《RNA 测序在线粒体病及罕见病应用的文献学习》

虽然NGS在孟德尔遗传病运用多年，已逐渐成为一线诊断手段。但在临床工作中，医生们对分子诊断的运用和结果的解读仍存在很多疑惑和瓶颈，比如：

1、临床工作中是否有基因不能确诊的遗传病？

2、是否对目前基因检测结果满意？从Panel到WES to WGS；怀疑基因公司水平？甚至推荐到多家公司检测？

3、对于基因检测的VUS如何处理？诊断？疑似？是否需要功能实验？

4、是否存在2个基因致病，取舍两难？

5、是否需要WGS？或WGS+RNA测序？

6、RNAseq测序的应用价值？是否可以从研究转化到临床诊断？等等

方方教授从孟德尔遗传病与非孟德尔遗传病（复杂疾病）致病原因比较、不同遗传检测方法比较、panel/WES/WGS等基因组变异检测诊断率分析、数据再分析对诊断率的提高、多次基因检测未确诊线粒体疾病相关病例分享逐步引入了线粒体多组学研究进展。介绍了多篇高价值的RNAseq在罕见病运用中的文章思路、结果和运用方向。详细阐述了：“RNA测序为什么可以用于临床诊断”。

WES和WGS发现基因变异的能力大大超过了我们解释其功能和对临床影响的能力。非编码区（如内含子区、启动子区、调控区等）变异在RNA的表达和剪接中发挥作用，其影响基因表达变异比例可高达30%；在转录组学研究中，几乎50%的导致异常剪切的致病变异位于深部内含子。

• “RNA测序为什么可以用于临床诊断”

RNA-Seq可以提供直接反应由DNA变化引起的转录水平改变。

1、RNA测序可以分析异常表达的基因（LOF导致降解、CNV、启动子和增强子、动态突变、甲基化等）

2、可以分析异常剪接变异（经典剪接位点、深度内含子、同义突变、错义突变、UTR变异等）

3、可以分析单等位基因表达（继发于无义介导mRNA降解，调控区导致表达降低，X染色体失活和印记等）。

• RNA测序应用的注意事项：

因为RNA表达具有时空特异性，所以在其运用过程中降低非生物学噪音、样本均一化处理、检测标本的选择非常重要。选择疾病受累的标本最优，血液虽然是较为容易获取的样本，但是表达基因数和表达水平对基因差异的检出存在局限性，血液样本获得的有效信息量较少。

传统的方法常将RNA测序作为基因组变异的功能验证使用【DNA导向的RNAseq整合分析】，该方法优先考虑已知基因，不能发现新基因；候选剪接变异依赖于生物信息学预测；无法使用RNA导向解决基因组阴性的的问题。

对于RNAseq导向无全基因组数据支撑的诊断中，可以使用离群值“outlier”的概念鉴定在一定样本量群体中的异常值。如【DROP】RNA分析模块化工作流，详细说明如何使用统计方法稳健的检测RNAseq数据中的异常表达、异常剪接和异常单等位基因表达。该流程推荐异常表达至少50-60个样本，异常剪接至少30个样本。

RNAseq不是一线诊断工具，它可以作为DNA诊断后的补充应用于临床罕见病诊断，支持对VUS变异的解释，对DNA忽视的变异进行重新排序，辅助解析影响基因表达水平和剪接的功能相关的DNA变异。多组学研究是未来遗传病的方向，在诊断、发病 机制、标记物鉴定以及治疗方面提供了依据。更多详细课程信息请扫描文末二维码回看视频直播（回看时间：9月14日至9月28日）。

方方教授

北京儿童医院神经内科主任

主要擅长对婴儿痉挛发病机制、治疗及脑形态学、线粒体脑肌病的基因诊断和呼吸链酶学测定、儿童多发硬化预后、治疗及头颅影像学变化特点、假性肌肥大型肌营养不良基因突变特征及免疫性脑炎等。

本次学习班学术氛围浓厚，多名国内外儿科神经病学学者、医师就儿童神经系统疾病诊疗进行学术交流，开拓了医师们的科研思路，优化了学术体系，进一步促进了学科的发展，为保障儿童健康做出贡献。

赛福基因与国内外儿科医生并肩作战，专注儿童遗传病/罕见病的精准防控与诊疗一体化工作，持续将科研成果转化，为临床医生提供更符合临床需求的产品与服务，努力实现“让每一个孩子更健康”的使命。

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